مجید کمیجانی

گلبول های سفید یکی از فاکتورهای مهمی هستند که تمامیت و سلامت آن ها برای سیستم دفاعی بدن اهمیت زیادی دارد. انسان ها درطول زندگی خود درمعرض آلاینده های زیست محیطی ازجمله کادمیوم قرار می گیرند. با توجه به افزایش روزافزون این آلاینده ، این احتمال وجود دارد که افزایش مشکلات خونی_ایمنی در شهرهای صنعتی به دلیل اثرات مخرب آلاینده ها بر لنفوسیت های انسان باشد. این پژوهش با هدف بررسی اثر کادمیوم کلراید بر قابلیت حیات، تمامیت غشا، ارزیابی ساختمان دورشته ای DNA و بررسی جنبه های مورفولوژیکی و بیوشیمیایی آپوپتوزیس در لنفوسیت های انسان انجام شده است. در این پژوهش ابتدا لنفوسیت ها از خون انسان با استفاده از فایکول جداسازی و به محیط کشت RPMI به صورت سوسپانسیون (در هر میلی لیتر106×1 سلول) وارد و به پلیت 96 خانه منتقل شدند. نمونه ها به سه گروه تقسیم شدند:1- لنفوسیت های لحظه صفر 2- لنفوسیت های گروه کنترل 3- لنفوسیت های تیمارشده با کادمیوم کلراید (µM 15).گروه2 و 3 به مدت 24 ساعت در انکوباتورCO2 دار و دمای 37 درجه قرارگرفتند. سپس نمونه های گروه های مختلف برای بررسی پارامترهای حیاتی لنفوسیت ها مورد استفاده قرار گرفتند. جهت بررسی قابلیت حیات از روش تریپان بلو و MTT استفاده شد. جهت بررسی آپوپتوزیس، از روش ایمنوسایتوشیمی برای بررسی فعال شدن کاسپاز-3 و جهت بررسی مورفولوژی و قطر هسته از رنگ-آمیزی آکریدین اورنژ استفاده شد. به منظور ارزیابی تمامیت غشا از روش فلوسایتومتری و رنگ آمیزی پروپیدیوم آیوداید و آکریدین اورنژ استفاده شد. همچنین جهت بررسی دناتوره شده از روش رنگ آمیزی آکریدین اورنژ استفاده شد. داده های حاصل با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه و تست توکی مورد تجزیه و تحلیل آماری قرار گرفت. تفاوت میانگین ها در سطح (p<0.05) معنی دار در نظر گرفته شد. تیمار لنفوسیت با کادمیوم کلراید به مدت 24 ساعت توانست قابلیت حیات لنفوسیت ها را در مقایسه با گروه کنترل کاهش دهد. همچنین باعث فعال شدن کاسپاز-3 ، کاهش قطر هسته و در روش فلوسایتومتری موجب آسیب به تمامیت غشا شد. با این حال در رنگ آمیزی پروپیدیوم آیوداید و آکریدین اورنژ آسیب به تمامیت غشا مشاهده نشد. در این زمان، کادمیوم تاثیری بر دناتوره شدن DNA نداشت. کادمیوم کلراید با اثرات سمی خود نه تنها موجب کاهش قابلیت حیات لنفوسیت های انسان بلکه موجب القا آپو