مشخصات پژوهش

عنوان	کلونینگ و بیان ژن یک آلفا توکسین (meuNa32) از غده زهری عقرب Mesobuthus eupeus
نوع پژوهش	پایان نامه های تقاضا محور و غیر تقاضا محور
کلیدواژه‌ها	همسانه‌سازی، بیان، غده زهری عقرب، آلفا توکسین
چکیده	عقرب‌ها ازراسته عنکبوتیان متعلق به شاخه بندپایان هستند که به علت سازگاری با اقلیم‌های مختلف کمتر تحت تاثیر انتخاب طبیعی قرار گرفتند و به خوبی توانستند تکامل خود را تا به امروز حفظ و قدمت طولانی کسب کنند. عقرب‌های ایران متعلق به دو خانواده بوتیده و اسکورپیونیده است. گونه مزوبوتوس ایپوس بدلیل فراوانی بالای ناشی از گزیدگی در استان‌های مختلف بویژه در منطقه جنوبی کشور از اهمیت ویژه‌ای برخوردار می‌باشد. در این پژوهش ژن رمز کننده آلفا توکسین meuNa32 از غده زهری عقرب Mesobuthus eupeus تکثیر و همسانه‌سازی شد. این توکسین توسط دو آنزیم محدود کننده EcoRI و HindIII مورد هضم آنزیمی قرار گرفت. از باکتری E.coli سویه (DH5α) و سویه (BL21) به ترتیب به عنوان میزبان همسانه‌سازی و بیانی به کار برده شدند. همچنین از pTG-19T و pET28b به ترتیب به عنوان حامل مناسب همسانه‌سازی و حامل بیانی برای ژن آلفا توکسین meuNa32 استفاده شد. نتایج همسانه‌سازی از طریق تکنیک Colony PCR و تعیین توالی حامل نوترکیب تایید شد. در این تحقیق توالی His-tag به انتهای ژن آلفا توکسین افزوده شد. بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از ژل SDS-PAGE صورت گرفت و وزن مولکولی پروتئین نوترکیب تقریبا KDa 10 تعیین شد. بالاترین میزان بیان پروتئین نوترکیب القا شده توسط IPTG با غلظت 1 میلی مولار و به مدت 6 ساعت در دمای ℃ 30 بدست آمد. همچنین دمای بهینه مناسب برای این توکسین ℃ 55 مشخص شد. از آنجایی‌که پپتید آلفا توکسین meuNa32 جزء توکسین‌های سدیمی می‌باشد که بر نفوذپذیری کانال‌های یونی اثر می گذارد، پیشنهاد می‌شود این توکسین برای درمان بیماری‌های مختلف و تولید پادزهر بالقوه در پزشکی کاربرد داشته باشد.
پژوهشگران	زهرا موسوی (دانشجو)، احمد همتا (استاد راهنما)