فائزه السادات ابطحی

سیر (Allium sativum) از جمله گیاهان دارویی است که دارای ترکیبات مختلف از جمله ویتامین های C،A ،B6 ،B2، B1، آلیسین (Allysine)، آجوئن ((Ajoene، ترکیبات سولفور و آنتی اکسیدان ها می باشد. اکثر ارقام سیر عقیم بوده و بذر تولید نمی کنند و تنها راه تکثیر استفاده از سوخ ها است. روش تکثیر غیر جنسی در سیر منجر به تجمع ویروس ها در مواد گیاهی شده، انتشار آن ها را تسهیل و در طی کشت و کار موجب کاهش محصول می شود. به منظور بررسی وضعیت آلودگی های ویروسی گیاه سیر تعداد 30 نمونه دارای علائم موزائیک و زردی در پائیز 1394 از شهرستان تنکابن جمع آوری گردید. نمونه های جمع آوری شده با استفاده از آزمون ساندویچ دو طرفه الیزا (DAS-ELISA) جهت بررسی وجود یا عدم وجود آلودگی به ویروس با آنتی بادی های چند همسانه ای ویروس موزائیک خیار(Cucumber mosaic virus, CMV)، ویروس موزائیک گوجه فرنگی (Tomato mosaic virus, ToMV)، ویروس موزائیک توتون (Tobacco mosaic virus, TMV)، ویروس پژمردگی لکه ای گوجه فرنگی (Tomato spotted wilt virus, TSWV)، ویروس موزائیک آرابیس (Arabis mosaic virus, ArMV)، ویروس رگه ای توتون (Tobacco streak virus, TSV)، ویروس جغجغه ای توتون (Tobacco rattle virus, TRV)، ویروس لکه حلقوی توتون (Tobacco ringspot virus,TRSV)، ویروس لکه حلقوی گوجه فرنگی (Tomato ringspot virus, ToRSV) و آنتی بادی جنس پوتی ویروس (Potyvirus)، تهیه شده از DSMZ آلمان مورد ارزیابی قرار گرفتند. از بین نمونه های جمع آوری شده آلودگی هفت نمونه به پوتی ویروس تایید و یک جدایه برای بررسی بیشتر انتخاب شد. جهت ردیابی دقیق تر ویروس در نمونه آلوده از آزمون RT-PCR استفاده شد. برای این منظور total-RNA جدایه انتخاب شده با استفاده از کیت تجاری شرکت سینا ژن (RNX-plus) استخراج و طی آزمون RT-PCR، قسمتی از ژنوم ویروس به طول 680 نوکلئوتید، مربوط به بخشی از چارچوب ژنی پروتئین پوششی ویروس با استفاده از آغازگرهای WCIEN/Oligo -dT تکثیر شد. قطعه تکثیر شده درون پلاسمید pGEM-T Easy Vector (Promega, USA) همسانه سازی و سپس به سلول های مستعد Escherichia coli سویهDH5α منتقل گردید. جهت حصول اطمینان از قرار گرفتن قطعه مورد نظر درون حامل، تجزیه تحلیل پلاسمید نوترکیب خالص سازی شده با استفاده از آنزیم های برشی انجام و توالی قطعه تکثیری تعیین گردید. مقایسه توا